粮食、油料检验　 过氧化氢酶活动度测定法

　　本标准适用于商品粮食过氧化氢酶活动度的测定。

　　1　仪器和用具

　　1.1　恒温水浴锅；
　　1.2 电炉；
　　1.3　离心机或吸滤装置；
　　1.4 锥形瓶：100ml;
　　1.5 量筒：10、15ml；
　　1.6 移液管：5、10、20ml;
　　1.7　研钵；
　　1.8 滴定管、细口瓶、漏斗等。

　　2　试剂

　　2.1　3％过氧化氢溶液：取30％过氧化氢溶液3ml加水稀释至30ml;
　　2.2 10％硫酸溶液；
　　2.3　0.1N高锰酸钾溶液；
　　2.4 pH7.7索伦逊磷酸盐缓冲液：
　　甲液，称取磷酸氢二钠11.876g溶于1l水中。乙液，称取磷酸二氢钾9.078g溶于1l水中。临用时，甲、乙液按9：1混合。
　　2.5　石英砂或用干净的玻璃片研制成的细砂。

　　3　操作方法

　　3.1　过氧化氢酶的提取：称取试洋(能换算成无水试祥1g)，放入研钵中，加少量细砂,量取缓冲液50ml，先倒出5～10ml于研钵中研磨试样，然后经漏斗倒入锥形瓶中，用剩余的缓冲液洗净研钵和漏斗，再把洗液倒入锥形瓶内，振摇后静置2～3h，用吸滤法或离心沉淀法获得透明的提取液。
　　3.2　酶活动度的测定：摇匀提取液，吸取20ml注入锥形瓶中，加入20ml水和3ml3％过氧化氢溶液，在室温下放置15～30min，加入5ml10％硫酸溶液，摇匀，用0.1N高锰酸钾溶液滴定剩余的过氧化氢，记下用去的高锰酸钾溶液毫升数(V1)。
　　3.3　对照试验：吸取20ml提取液注入锥形瓶中, 置于沸水浴中加热5min，或用直接煮沸法破坏过氧化氢酶。加20ml水和3ml3％过氧化氢溶液于锥形瓶中，在室温下放置15～30min,再加入10％硫酸5ml，摇匀，用0.1N高锰酸钾溶液滴定，记下用去的毫升数(V2)。

　　4 结果计算

　　过氧化氢酶活动度按下列公式计算：
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　　过氧化氢酶活动度(mgH2O2/1g试样) = (V1-V2) × N × 17 × ──
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　　式中：V1--酶活动度测定时所用的0.1N高锰酸钾溶液体积，ml；
　　V2--对照试验时用去的0.1N高锰酸钾溶液体积，ml；
　　N--高锰酸钾溶液当量浓度；
　　17--H2O2的毫克当量。
　　双试验结果允许差不超过平均值的10％，取平均值为测定结果。测定结果取小数点后第一位。