土壤有效硼测定方法

　　1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了测定土壤中有效硼的姜黄素吸光度法。
　　本标准适用于各类土壤有效硼的测定。

2 测定原理

　　土壤用热水浸提出的硼，与作物对硼的反映有较高的相关性。浸提液中硼在草酸存在下与姜黄素作用，经脱水生成玫瑰红色的络合物。用乙醇溶解后测定其吸光度。红色络合物溶液在0.0025～0.05μgB/mL范围里，符合朗伯-比尔定律。

3 主要仪器设备

　　试验中所用玻璃器皿使用前应用1＋3盐酸浸泡2～4h，然后用水冲洗干净并晾干。
3.1 土样筛（尼龙筛）2.0mm方孔筛。
3.2 分析天平，感量0.0001，0.001g。
3.3 分光光度计。
3.4 电热恒温水浴。
3.5 调温电炉或酒精灯。
3.6 锥形瓶250mL（石英或低硼玻璃）。
3.7 回流冷凝管（石英或低硼玻璃）。
3.8 蒸发皿50mL（石英或聚乙烯制品）。
3.9 刻度移液管1.00，5.00，20.0mL。
3.10 聚乙烯瓶30，60，1000mL。
3.11 中速滤纸11cm。

4 试剂

　　试验中所有用水，均为去离子水或石英蒸馏器重蒸馏水。
4.1 95％乙醇（GB 679分析纯）。
4.2 硫酸镁溶液：10.00g MgSO4·7H2O（GB 671，分析纯）溶于100mL水中。
4.3 姜黄素-草酸溶液：称取0.040g姜黄素和5.00g草酸（HG 3─988，优级纯） 溶于100mL95％乙醇中（4.1），充分搅动使之溶解完全，贮于棕色玻璃瓶中。此液应在使用前一天配制好，密闭好存放在冰箱内可使用一周。
4.4 硼标准溶液：称取0.5720g干燥的硼酸（GB 628，优级纯）溶于水中，定容至1L，盛于塑料瓶中。此液为100μg/mL硼贮备溶液。将此硼贮备溶液稀释10倍，即为10μg/mL硼标准工作液。

5 测定步骤

5.1 土壤有效硼的浸提
　　称取10.00g风干过2.0mm筛的土样于250mL锥形瓶中，按1∶2土水比，加20.0mL水，连接冷凝管，文火煮沸5min，立即移开热源，继续回流冷凝5min（准确计时），取下锥形瓶，加入2滴硫酸镁溶液（4.2），摇匀后立即过滤，将瓶内悬浮液一次倾入滤纸（3.11）上，滤纸承接于聚乙烯瓶内。
　　同一试样做两个平行测定。
　　同时用水按上述提取步骤制备空白溶液。
5.2 显色测定
　　移取1.00mL滤液于50mL蒸发皿内（3.8），加4.00mL姜黄素-草酸溶液（4.3），在恒温水浴55±3℃上蒸发至干，自呈现玫瑰红色时开始计时继续烘焙15min，取下蒸发皿冷却到室温，加入20.0mL95％乙醇（4.1），用橡胶淀帚擦洗皿壁，使内容物完全溶解，用中速滤纸过滤到具塞容器内（此溶液放置时间不要超过3h），以95％乙醇（4.1）为参比溶液，在分光光度计550nm波长处。用1cm光径比色皿测定吸光度。
注：① 若土壤中硝酸根含量超过20μg/g时，对显色有干扰，须吸取一定量的滤液加饱和氢氧化钙溶液，放在水浴上蒸干后灼烧破坏硝酸根，然后用0.1mol/L盐酸溶解残渣，再进行显色。
② 待测液及空白溶液与标准系列溶液的显色条件，（如温度、容器的种类与体积、蒸发的速度）必须严格保持一致。
5.3 工作曲线绘制
　　用10μg/mL硼工作溶液（4.4），按0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0μg/mL硼浓度配成硼标准系列溶液，分别吸取1.00mL按5.2操作显色测定吸光度并绘制工作曲线。

6 分析结果计算

　　样品吸光度减去空白吸光度后，由工作曲线查得硼浓度。
　　土壤有效硼含量以mg/kg表示，按下式计算：
土壤有效硼含量＝2c

式中：c──样品吸光度由工作曲线查得硼浓度，mg/kg；
2──水土比。

　　注：如果土壤有效硼含量较高时，待测液中硼超过1μg/mL时， 应将滤液稀释后进行显色。计算时乘以稀释倍数。

7 平行结果的允许差

　　两平行测定结果用算术平均值表示，保留小数后二位数字。
　　两平行样测定结果的允许差：土壤有效硼小于0.2mg/kg硼时，为0.03mg/kg；有效硼在0.2～0.5mg/kg时，为0.05mg/kg；有效硼大于0.5mg/kg时，相差不超过0.06mg/kg