H5亚型禽流感病毒检测再提速

　　■技术人员在2~3小时内就可以检测出禽流感病毒

　　■比原有的荧光RT-PCR检测方法用时缩短一半，且检验成本较低

　　■集靶核酸扩增、检测和结果判定于一体

　　■技术敏感性高、准确性好，且无需昂贵仪器

　　■非常适合基层单位现场疫病检测使用

《高品质畜禽产品关键检测技术研究及示范应用》课题组科研团队

　　近日，由北京检验检疫局研发的禽流感新检验方法——LAMP快速检测技术顺利通过验收，技术人员在2~3小时内就可以检测出禽流感病毒。据该技术研发团队北京检验检疫局《高品质畜禽产品关键检测技术研究及示范应用》课题组负责人赖平安研究员介绍，此检测方法比原有的荧光RT-PCR检测方法用时缩短一半，且检验成本较低，未来将在基层检疫机构和养殖场推广。

　　RT-LAMP快速检测技术学名为环介导等温扩增法，是集靶核酸扩增、检测和结果判定于一体的快速检测方法，能够在2至3个小时之内得到检测结果，该技术敏感性高、准确性好，且无需昂贵仪器。实验证明RT-LAMP检测方法与国标荧光RT-PCR检测方法的阳性符合率为100%，非常适合基层单位现场疫病检测使用。

　　据悉，目前我国畜禽产品疫病检测存在的主要问题是生产企业、基层兽医部门与上层畜禽产品疫病检测、监测权威部门所采用的方法不一致，一般来说基层兽医部门不具备昂贵仪器设备，所使用的检测方法简单，检测的准确性、敏感性相对较差；而质量安全权威检测部门设备先进、拥有各方面的专业技术人才，检测方法敏感性更高、准确性更好。客观上造成有时基层检测结果合格的畜禽产品，而在权威部门抽检不合格。检测结果的不一致，往往影响食品安全各级执法部门的客观公正，是造成我国食品生产质量参差不齐的主要原因之一。

　　为了解决畜禽肉产品检测中存在的这一矛盾，更好地为我国畜禽肉品安全从养殖、屠宰、加工等环节现场监管和各级执法部门建立统一标准方法提供良好的技术保障，北京检验检疫局科研技术人员将科研重心偏向了推进动物疫病现场快速检测关键技术的发展。在详细了解国内外相关研究方向的最新进展基础上，《高品质畜禽产品关键检测技术研究及示范应用》课题组应运成立。这支结构合理、团结协作和多学科背景的研究队伍的组成，为LAMP技术在畜禽养殖场疫病检测中的应用奠定了坚实的基础。

　　赖平安研究员介绍说：“LAMP技术是自2000年以来，在分子诊断领域取得的一项重大科技成果，该技术的突破性进展就是集靶核酸扩增、检测和结果判定于一体。我们在报这个选题之初，就是想利用LAMP技术敏感性高、准确性好，不需昂贵设备，易于推广应用等特点，来克服目前实验室检测方法操作复杂、现场快速检测方法灵敏度不高的缺陷，整个研发过程很顺利，在大量实验的基础上，保质保量地完成了任务书中的要求，建立了H5亚型禽流感病毒和美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的等温扩增快速检测技术。”

　　大事记>>

　　2008年4月

　　启动项目研究，收集课题研究所需的技术资料，与合作单位协商研究方案和技术路线，与技术发明者日本荣研公司建立交流渠道。

　　2008年6月至10月

　　设计LAMP技术引物，进行验证和筛选；2008年11月至2009年4月建立禽流感和蓝耳病的检测方法，并用已知阴阳性质控样品优化检测操作程序和检测体系，确定出检测方法的灵敏度、准确性、重复性等性能参数。

　　2009年5月至12月

　　优化反应体系，建立闭管、结果目测判定的LAMP检测方法，并进行初步临床验证。

　　2010年1月至3月

　　将优化后的LAMP检测方法更大范围应用于北京市畜禽养殖企业禽流感病毒H5亚型检测和病死猪蓝耳病检测。

　　2010年4月9日

　　《高品质畜禽产品关键检测技术研究及示范应用》课题顺利通过验收。

　　关键词>>

　　LAMP快速检测技术

　　学名为环介导等温扩增法，英文全称为loop-mediated isothermal amplifica?鄄tion，缩写为LAMP。近年来，随着分子诊断技术的日新月异，产生了多种新型核酸扩增技术，其中LAMP快速检测技术是集靶核酸扩增、检测和结果判定于一体的快速检测方法，它使分子生物学检测方法趋于更加方便快速、成本低廉的方向发展。

　　H5亚型禽流感病毒

　　禽流感是禽流行性感冒的简称，这是一种由甲型流感病毒的一种亚型引起的传染性疾病综合征，被国际兽疫局定为A类传染病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。不仅是鸡，其它一些家禽和野鸟都能感染禽流感。按病原体的类型，禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性三大类。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少、产蛋量下降，出现零星死亡。高致病性禽流感最为严重，发病率和死亡率高，感染的鸡群常常“全军覆没”。甲型流感病毒根据其表面蛋白质的不同被分为H1到H15等15种亚型。世界各地的禽流感主要由高致病性的H5和H7两种亚型引起，目前亚洲及我国暴发的禽流感多是H5亚型。

　　观点>>

　　科研一定要面向实际

　　北京检验检疫局具有自主知识产权的，利用RT-LAMP技术检测H5亚型禽流感病毒和美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速检测方法一经问世，迅速引起了业内外人士的广泛关注。来自中国农业大学、中国检科院、北京畜牧兽医总站、中国兽药监察所等单位专家组成的验收组一致认为，该课题建立的方法特异性强，灵敏度高，可应用于动物及其产品中疫病病原的检测检验，对提高动物疫情科学监管水平具有良好的应用前景。

　　在谈到RT-LAMP快速检测技术的应用前景时，北京检验检疫局副局长杨金良介绍说，该技术不仅适用于H5亚型禽流感和猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测，未来将应用在养猪场病、死猪的蓝耳病快速现场检测，养鸡场大的病、死鸡禽流感病毒H5亚型快速现场检测及活鸡屠宰加工前疫情抽检，这可为食品安全生产、现场监管、各级执法部门标准统一提供良好的技术保障。

　　说到禽流感检测技术，北京检验检疫局科研人员早在2005年就攻坚克难，取得了突破性进展。该局研制的禽流感荧光RT-PCR检测试剂盒，使禽流感检测时间从过去的21天缩短到4小时，还通过了禽流感病毒检测的4项国家标准。目前，该成果已在全国多个检验检疫局、出口养禽企业、省级动检站得到了应用。

　　杨金良副局长表示，北京检验检疫局在禽流感检测技术的研发工作只是该局科研工作的一角。近年来，北京检验检疫局的科研工作，紧扣检验检疫事业发展需求，结合国际科技前沿技术发展情况，以前瞻性、突破性和带动性强的重大科研项目为着力点，正在逐步实现由被动应对突发事件向超前技术储备和建立突发事件预警体系的方向转变，从“小而散”向技术集成和规模化的方式转变。在谈到该局的科研战略及成绩时，他不断地提到“4-5-6-3-3”的战术：

　　北京检验检疫局科研必需立足“4个基本点”，检验检疫工作中的重点、热点、难点、盲点；主攻“5个领域”，即安全、健康、卫生、环保、反欺诈；做到“6个结合”，即科技工作与检验检疫业务相结合，与本局的实际状况相结合，与实验室建设相结合，与人才培养相结合，与纵横向联合相结合，与地方经济社会发展形势相结合。经过多年积淀，精心打造,该局目前建立了：荧光定量PCR、生物芯片和纳米检测“3大检测技术平台”；建立了科技管理部门重“管”、技术中心重“检”、检科院重“研”的“三级科技保障体系”。